1.該模型制備比較成熟，國(guó)內(nèi)外都有此模型，構(gòu)建和評(píng)價(jià)指標(biāo)一致，所以該模型應(yīng)用廣泛，具有統(tǒng)一的操作規(guī)程。

2. 該模型制備的關(guān)鍵：1）小鼠必須是重度免疫缺陷的，而且飼養(yǎng)環(huán)境必須潔凈；2）HIV操作需要生物安全。

3.此模型具有完善的人的免疫系統(tǒng)，HIV感染后，具有艾滋病病人相似的臨床癥狀，所以具有很高的比較醫(yī)學(xué)應(yīng)用價(jià)值。

1、 SIVmac239靜脈感染恒河猴外周血病毒載量結(jié)果

8只SIVmac239靜脈感染恒河猴血漿載量變化規(guī)律基本一致（圖1）。Rid1、Rid3、Rid7、Rid9、Rid12、Rid13在SIVmac239感染后4d就檢出病毒載量陽(yáng)性，Rid5、Rid10兩只感染猴在SIVmac239感染后7d檢出病毒載量陽(yáng)性。隨后，8只SIVmac239靜脈感染恒河猴在感染后11d-14d達(dá)到高峰，峰值在106至107 copies/mL之間，隨后迅速下降。8只感染猴在感染后42d-210d之間載量保持穩(wěn)定水平，其中，Rid7、Rid13兩只感染猴在此期間血漿病毒載量維持在104 copies/mL左右；Rid1、Rid3、Rid5、Rid9、Rid10、Rid12六只感染猴在此期間血漿病毒載量仍保持在較高水平，約為105至106copies/mL之間。

圖1 SIVmac239靜脈感染中國(guó)恒河猴外周血病毒載量結(jié)果

Fig.1 The viremia (viral RNA copies/ml plasma)in Chinese-original rhesus macaques infected intravenously with SIVmac239

1、 SIVmac239靜脈感染恒河猴CD4+/CD8+比值結(jié)果

8只SIVmac239靜脈感染恒河猴CD4+/CD8+比值均在感染后10d之內(nèi)發(fā)生應(yīng)激性增高，隨后迅速下降，維持在各自的穩(wěn)定水平。Rid7感染猴在感染后112天CD4+/CD8+比值發(fā)生倒置，之后一直維持在1.0以下。其余7只感染猴均未出現(xiàn)CD4+/CD8+比值倒置（圖2）。

圖2 SIVmac239靜脈感染中國(guó)恒河猴外周血CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值

Fig.2 The changes of CD4+/CD8+ ratio of T lymphocytes in Chinese-original rhesus macaquesinfected intravenously with SIVmac239

SIVmac239靜脈感染恒河猴CD4+ T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)

8只SIVmac239靜脈感染恒河猴后在感染后CD4+ T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)均迅速下降，至感染后11d CD4+ T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)下降至最低，隨后迅速回彈，再緩慢下降，維持在各自穩(wěn)定的水平。其中，Rid1感染猴在感染150d后CD4+ T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)下降至200個(gè)/μL左右，Rid7感染猴在感染154d后CD4+ T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)下降至100個(gè)/μL左右，兩只感染猴的CD4+ T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)維持在較低水平（圖3）。

圖3 SIVmac239靜脈感染中國(guó)恒河猴外周血CD4+T淋巴細(xì)胞絕對(duì)數(shù)

Fig.3 The CD4+T cell counts (per l blood) in Chinese-origin rhesus macaques infectedintravenously with SIVmac239

1、 實(shí)驗(yàn)用病毒：感染毒株為SIVmac239中國(guó)恒河猴細(xì)胞適應(yīng)株，使用中國(guó)恒河猴PBMCs擴(kuò)增制備，CEMx174細(xì)胞滴定TCID50為3×105/mL。

2、 感染動(dòng)物：選用體重4-6kg的SPF恒河猴。實(shí)驗(yàn)前體檢無(wú)異常，必須排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆轉(zhuǎn)錄D型病毒(SRV-1，2，5)和猴T淋巴細(xì)胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒（SIV）易感性密切相關(guān)的4種基因（Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17）篩查結(jié)果為陰性。所有感染動(dòng)物必須在ABSL-3室中進(jìn)行。

3、 感染方法：將SIVmac239病毒原液1:100稀釋至1 mL，經(jīng)后肢靜脈接種恒河猴。

4、 SIVmac239靜脈感染猴樣品采集和指標(biāo)測(cè)定：在感染前和感染后10、17、24、28、42、56、84天采集EDTA抗凝血4mL，分別測(cè)定血常規(guī)、血漿病毒載量、CD4+/CD8+、CD4+細(xì)胞絕對(duì)數(shù)。

5、 SIVmac239靜脈感染猴血漿病毒載量的測(cè)定：提取EDTA抗凝血漿中病毒RNA，使用SYBR Green I 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法測(cè)定血漿病毒載量。

6、 SIVmac239靜脈感染猴外周血CD4+/CD8+比值及絕對(duì)數(shù)測(cè)定：CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗體標(biāo)記EDTA抗凝全血淋巴細(xì)胞，流式細(xì)胞儀測(cè)定CD4+/CD8+比值，并根據(jù)血常規(guī)結(jié)果，計(jì)算出CD4+T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)。

一、 艾滋病概述

艾滋病(AcquiredImmunodeficiency Syndrome, AIDS)，是由人免疫缺陷病毒（Human ImmunodeficiencyVirus, HIV）引起，以全身免疫系統(tǒng)嚴(yán)重?fù)p害為特征的傳染性疾病，是20世紀(jì)危害人類(lèi)健康和生命最嚴(yán)重的病毒性疾病之一。自美國(guó)CDC報(bào)道首例艾滋病后，到20世紀(jì)80年代中期艾滋病發(fā)展成為一個(gè)性的流行病。截止2014年底，HIV已感染3690萬(wàn)人，2014年新增感染者200萬(wàn)，2014年因艾滋病死亡120萬(wàn)人。艾滋病在1985年傳入我國(guó)，截至2015年5月31日，歷年累計(jì)報(bào)告艾滋病530628例，其中艾滋病病人217457例，死亡167159例。艾滋病早已成為關(guān)注的公共衛(wèi)生和社會(huì)熱點(diǎn)問(wèn)題，艾滋病的預(yù)防與治療也成為當(dāng)代生物醫(yī)學(xué)研究的前沿?zé)狳c(diǎn)之一。

二、艾滋病動(dòng)物模型簡(jiǎn)介

艾滋病發(fā)病機(jī)制研、藥物和疫苗的保護(hù)性研究及評(píng)價(jià)等方面在很大程度上依賴(lài)?yán)硐氲膭?dòng)物模型。人們發(fā)現(xiàn)HIV以后，用HIV感染過(guò)多種動(dòng)物，但由于種種原因，結(jié)果并不理想。研究發(fā)現(xiàn)猴免疫缺陷病毒(SIV)感染實(shí)驗(yàn)用猴的模型效果比較理想，表現(xiàn)為和AIDS的臨床表征，發(fā)病過(guò)程、免疫缺陷特征等非常相似，加之HIV和SIV有一定的基因同源性，人和猴的生物學(xué)特性也較其他動(dòng)物接近，因而，SIV/SAIDS(猴艾滋病)模型被廣泛接受和應(yīng)用。

SIV是猴獲得性免疫缺陷綜合征（SimianImmune Deficiency Syndrome，SAIDS）的主要致病病毒，為典型的C型病毒粒子，基因組長(zhǎng)度大約為9.2kb，基因組成同HIV-1和HIV-2基本相同，其完整的原病毒基因含有二個(gè)LTR以及同HIV類(lèi)似的基因：gag、pol、vif、tat、rev、env和nef。所有基因在SIV的排列順序同HIV完全一樣。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)SIV的研究多集中在非克隆株SIVmac251和克隆株SIVmac239上，因?yàn)檫@兩個(gè)病毒株能在多種獼猴屬動(dòng)物身上引發(fā)致死性免疫缺陷綜合征，同時(shí)伴有CD4+淋巴細(xì)胞下降，繼發(fā)機(jī)會(huì)性感染病毒性腦膜腦病。這些都與人類(lèi)AIDS類(lèi)似。

艾滋病的三種傳播途徑分別是經(jīng)血液、性和母嬰傳播，性傳播包括同性傳播和異性傳播兩種方式。艾滋病動(dòng)物模型的制備首先要考慮其實(shí)際應(yīng)用價(jià)值，最好的動(dòng)物模型可以最大限度的模擬人類(lèi)疾病，包括使用與自然感染相同或接近的方式建立模型。為充分模擬靜脈注射吸毒人群的感染方式，通過(guò)靜脈途徑，病毒直接感染血液中的靶細(xì)胞，從而制備靜脈途徑艾滋病恒河猴感染模型。