生活性應激源暴露是臨床抑郁癥的重要誘發因素。臨床研究表明，長期暴露于不可控、不可預見的生活事件的人更容易催患抑郁障礙。CUMS 動物模型讓動物經歷多種慢性不可預知、低強度刺激，與人類抑郁癥誘因相似，其病因和病理機制接近于人類抑郁癥，是經典抑郁癥動物模型，廣泛應用于抗抑郁藥物作用的研究。20 世紀80 年代早期，Katz 開始了對慢性應激模型的研究，即給予動物一系列高強度刺激因素(電擊、噪聲、長時間行為限制等)，連續三周，動物表現出抑郁樣狀態。Willner在此基礎上進行了改進，降低了應激刺激的強度，延長應激時間，并將快感缺乏的測試作為CUMS 的主要評價方法，建立了CUMS 動物模型。該模型主要模擬了人類抑郁的核心癥狀：快感缺乏，同時也模擬了中重度抑郁癥的其他表現，如社會交往能力下降，探索行為能力下降等。

本研究中，通過糖水偏愛你實驗、新奇抑制攝食實驗、懸尾實驗和強迫游泳結果可以看CUMS模型組大鼠糖水偏愛指數下降、新奇攝食抑制實驗潛伏期延長、懸尾及強迫游泳實驗不動時間延長，與正常組相比，具有顯著性差異，而經典的抗抑郁藥氟西汀給藥可以逆轉這些抑郁樣行為。提示大鼠CUMS模型成功。此外本實驗還對CUMS模型的機制進行了基礎研究，認為CUMS模型會導致動物皮層和海馬組織的5-HT和DA神經遞質水平顯著性降低，血清皮質酮含量顯著升高，海馬BDNF水平顯著降低（P<0.05）。因此我們認為采用慢性不可預測應激，35天可以造成大鼠抑郁樣行為，并且經過本實驗室的驗證，該實驗條件對于小鼠同樣適用。

模型技術難點在于對于CUMS刺激因子的選擇，刺激因子的選擇可能影響實驗模型的成功與否，常用的刺激因子有禁食(12 h)、禁水(12 h)、冷水游泳(4 °C，5 min)、熱水游泳(42 °C，5 min)、動物叫聲(0.5 h)、束縛(使用自行研發的小鼠行為限制器，長20 cm，直徑7 cm)、晝夜顛倒、配對飼養、濕籠、傾籠等。每日選擇2~3 種刺激，并盡量使應激程序符合不可預測的特點，以避免動物產生適應性。相同的刺激因子應該隔3-7日再進行。

本研究通過不同的刺激因子對大鼠造成慢性不可預測應激模型，通過糖水偏愛、新奇環境攝食抑制實驗、懸尾、強迫游泳實驗等經典行為學指標，以及神經遞質、皮質酮和神經營養因子等基礎機制指標，表明了慢性不可預測應激誘導大鼠抑郁模型的成功，并且該模型對于BALB/c 小鼠等同樣適用，本模型可用于進一步的抗抑郁藥物的藥效學評價。

本實驗采用健康成年SPF級大鼠。飼料墊料均為高壓滅菌產品，購自北京維通利華實驗動物有限公司，動物用水均經過除菌處理。實驗動物以完整的包裝直接進入實驗室，觀察適應5天后無異常情況，方進行實驗。實驗過程中動物操作均符合動物倫理學規范，對環境和生態影響等符合國家相關法律規定。

1 實驗材料

（1）藥品與試劑：

鹽酸氟西汀片，批號：20190516，常州四藥制藥有限公司。標準物質多巴胺（DA）、5-羥色胺（5-HT）來自Sigma Aldrich公司（圣路易斯，美國莫州）。酶聯免疫吸附測定BDNF、CORT試劑盒購自南京建成生物技術研究所（南京，中國）。

（2）儀器：

① 行為學檢測：糖水偏愛、新奇環境攝食抑制實驗、大鼠懸尾實驗、大鼠強迫游泳實驗

② 機制檢測：全自動酶標儀（美國Bio-Rad公司）、超聲細胞破碎儀（美國Sonics公司）、分析天平（梅特勒托利多公司）。

2 評價方法

（1） 行為學評價:

① 糖水偏愛：

分為訓練期和測試期。訓練期內，實驗共需3d，第一個24h，大鼠飲水瓶為兩瓶均裝有1%蔗糖水各100ml；第二個24h，大鼠飲水瓶為一個瓶裝有1%蔗糖水100ml，一個瓶裝純凈水100ml；再經過24h的禁食禁水后，進行動物的基礎糖水/純水消耗實驗：同時給予每只大鼠事先定量好的兩瓶水：一瓶1%蔗糖水100ml，一瓶純水100ml，1h后，取走兩瓶并稱重，計算動物的總液體消耗，糖水消耗，純水消耗，糖水偏好指數。為避免位置偏愛影響因素，測試中間，將兩瓶位置互換。造模前，進行糖水偏好訓練及基線測試，根據測試結果，將動物分組。造模結束后，再進行一次糖水偏愛測試，以評價動物快感缺失的癥狀。

② 新奇環境攝食抑制實驗

采用圓形敞箱（直徑90cm，高60cm），每次檢測前再測試箱中心放3粒同等大小的食丸。大鼠在禁食禁水24小時后，面向測試箱壁沿著箱壁放入敞箱中，每次從同一方向、同一位置放入，記錄15 min內第一次攝食潛伏期（以大鼠第一次咬食食丸為標準），即動物自放入測試箱中至首次攝取食物的時間。（2）皮質酮含量的測定

③ 大鼠懸尾實驗

于距大鼠尾尖部用膠布纏上掛于支架上, 使大鼠成倒掛狀態, 其頭部離箱底約5cm。懸掛時間為6min, 統計大鼠后4min內懸尾累積不動時間（不動狀態即大鼠停止掙扎不動或無任何活動）。

④ 大鼠強迫游泳實驗

大鼠強迫游泳實驗方法分為訓練期和測試期，大鼠放入裝有30cm水的透明亞克力塑料圓桶內（直徑18cm，高40cm）, 水溫維持在24 ± 1°C，連續兩天游泳。第一天使其預游泳（預適應）15min。24h后進入測試期，將大鼠放入桶中，記錄5min內大鼠的不動時間（不動即大鼠停止掙扎，呈漂浮直立狀態，僅有偶爾的肢體運動以及保持頭部浮在水面的持續時間）。

⑤ 神經遞質檢測

采用實驗室前期的實驗方法-LC-MS/MS進行測定。

色譜條件：色譜柱 2.0 mm×150 mm，3 μm（TSK Gel amide 80，TOSOH公司）；流動相：乙腈-15 mM甲酸銨水溶液（pH 5.5）（40:60）；柱溫：35 ℃；樣品室溫：4 ℃；流速：0.4 ml/min。

質譜條件：以電噴霧電離方式進行離子化，以多反應檢測（MRM）模式進行掃描，離子源及其他相關參數優化為：TEM: 500 ℃; CAD: Medium; Gas1: 50 psi; Gas2: 70 psi; CUR: 20psi。+MRM模式參數為：噴霧電壓5500 V; EP: 10; CXP: 10；-MRM模式參數為：噴霧電壓-4500 V; EP: -10; CXP: -13；

1 動物：SPF級SD大鼠，30只，雄性，體重180-220g。分為空白對照組、CUMS模型組、陽性藥組。

2 模型誘導方法：

慢性不可預測性應激模型的建立

在本課題組前期CUMS應激方法的基礎上進行改進。除正常對照組外，其余大鼠每日隨機接受各種不同的應激源的刺激，包括：束縛 6h、濕籠 12 h、冰水游泳（4°C）5min、熱水游泳（42°C）5min，頻閃12h、45度斜籠7 h、夾尾3min, 噪音24 h、電擊10 min、晝夜顛倒、持續光照36h、禁食禁水24h、冰水游等刺激，每天隨機安排，同一種刺激不能連續出現，使動物不能預見給予的刺激，每日1～2種。造模時間持續35d。從造模開始各組分別灌胃給予相應藥液，給藥期間各組繼續造模，連續給藥35d，末次給藥后進行相關行為學檢測，并取腦組織進行相關檢測。空白對照組正常飼養。

時間-造模方式-具體安排

星期一

冰水游泳10min+頻閃12h+噪音30min

8:50am-9:00am 冰水游泳

9:00-9:30am噪音

9:00am-9:00pm頻閃

星期二

禁水12h+濕籠12h

9:00pm-9:00am濕籠

星期三

電擊5min+晝夜顛倒

9:00am-9:30am 電擊

星期四

熱水游泳10min+頻閃12h+噪音30min

8:50am-9:00am熱水游泳

9:00-9:30am噪音

星期五

禁食12h+間斷照明30min

9:30am-9:30pm束縛

9:30pm-9:30am傾籠

星期六

夾尾3min +頻閃12h+噪音30min

9:00-9:30am噪音

9:00am-9:00am頻閃

星期日

束縛6h+傾籠12h

8:30am-8:30pm禁食；9:00am-9:00pm間斷照明

抑郁癥是一種嚴重影響人體健康的精神疾病，其患病率約占總人口的3% [1]。世界衛生組織預測到2020 年抑郁癥將成為第二大主要疾病之一，給社會帶來極大經濟負擔[2]，抑郁癥已成為全世界共同面臨的衛生健康難題。近年來研究發現，應激性生活事件是抑郁癥的顯著促發因素[3]，引發抑郁的主要原因是來自慢性、低強度、長期的日常壓力。

文獻中關于建立該模型所使用的大小鼠品系繁多。慢性不可預測應激（Chronic unpredictable mild stress, CUMS）動物模型采用常用的模式動物，如大鼠和小鼠。多選用Sprague-Dawley、 Wistar大鼠、BALB/c小鼠、昆明小鼠、ICR小鼠、C57BL /6J小鼠等[4-9]。關于大小鼠的選擇，80%的研究選擇了大鼠，雄性多見。目前，文獻報道的CUMS刺激因子的多變性、不可預見性是模型成功的關鍵，單獨使用一種刺激不能產生理想的效果，每種刺激因子應間隔3～7 d[10]，大部分CUMS造模過程都選擇了7-11種刺激因子，只有少數實驗選擇了≥12或≤6種的刺激因子，最少的用了4種，最多的用了14種。造模周期有2-8周不等，其中以3-6周最為常見。本模型選用適宜的造模時間-35天，以及常用的幾種刺激因子，確定該模型誘導的抑郁模型為現代人類長期處于慢性不可預測應激作用下誘發的抑郁癥機理研究、防護和藥物研究提供實驗模型。

參考文獻：

[1] Sartorius N.The economic and social burden of depression.J Clin Psychiatry 2001; 62 Suppl15: 8–11.

[2] Murray CJ,Lopez AD. Alternative projections of mortality and disability by cause1990-2020: Global Burden of Disease Study. Lancet 1997; 349(9064): 1498–1504.

[3] 趙幸福, 徐一峰. 生活事件與抑郁癥[J]. 上海精神醫學, 1995, 7(3):209–211.

[4] 黃鶯, 徐維平, 魏偉,等. 黃精皂苷對慢性輕度不可預見性應激抑郁模型大鼠行為學及血清中微量元素的影響[J]. 安徽醫科大學學報, 2012(3):62-65.

[5] 梁軍, 陳燕, 胡敏, 等. 慢性不可預知性應激刺激建立大鼠顳下頜關節紊亂病模型[J]. 實驗動物科學, 2009, 26(1):15-18.

[6] 姜寧, 范琳犀, 楊玉潔, 等. 金釵石斛提取物對慢性不可預見應激模型小鼠的抗抑郁作用[J]. 生理學報, 2017(2):41-48.

[7] 陳海軍, 王慧茹, 胡嘉航, 等. 寧夏無果枸杞芽提取物對慢性溫和不可預見性應激小鼠學習、記憶的影響[J]. 神經解剖學雜志, 2014, 30(02):88-93.

[8] 荊然, 李慧峰, 程艷剛, 等. 五味子不同炮制品對小鼠慢性不可預知性應激抑郁的改善作用[J]. 現代藥物與臨床, 2016, 31(11):1698-1702.

[9] 黃巧玲, 吳華麗, 蔡旻煊, 等. 皮質酮與慢性不可預見性應激誘導的兩種抑郁癥模型比較[J]. 解剖學報, 2017,048(003):273-281.

[10] Willner P．Chronic mildstress ( CMS) revisited: Consistency and behavioural-neurobiologicalconcordance in the effects of CMS[J]. Neuropsychobiology，2005, 52(2) :90-110．