WST650-2019抗菌和抑菌效果評(píng)價(jià)方法
公司簡(jiǎn)介
健明迪檢測(cè)提供的WST650-2019抗菌和抑菌效果評(píng)價(jià)方法，抗抑菌產(chǎn)品檢測(cè)新標(biāo)準(zhǔn)WST650-2019抗菌和抑菌效果評(píng)價(jià)方法于2019年7月1日起實(shí)施，健明迪檢測(cè)準(zhǔn)確把握消毒政策要求變化，提供抗抑菌劑等消毒產(chǎn)品產(chǎn)品檢測(cè)備案
推薦閱讀：抗菌制品檢測(cè) 5.2抗菌效果
5.2.1懸液定量殺菌試驗(yàn)
5.2.1.1適用范圍
適用于液體抗菌產(chǎn)品（如液體抗菌液、抗菌噴霧劑等）對(duì)微生物抗菌效果的測(cè)定。
5.2.1.2試劑、培養(yǎng)基及器材
中和劑(用PBS配制)，其它見(jiàn)5.1.1.2。
5.2.1.3菌懸液配制
取試驗(yàn)菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，用PBS稀釋至約5.0×105CFU/mL～4.5×106CFU/mL菌懸液備用。
5.2.1.4中和劑鑒定試驗(yàn)
5.2.1.4.1分組
第1組：5.0mL中和劑+0.1mL菌懸液→培養(yǎng)
第2組：（0.5mL抗菌劑+4.5mL中和劑）+0.1mL菌懸液→培養(yǎng)
第3組：5.0mL稀釋液+0.1mL菌懸液→培養(yǎng)
第4組：稀釋液+中和劑+培養(yǎng)基→培養(yǎng)
5.2.1.4.2步驟
根據(jù)試驗(yàn)分組，準(zhǔn)備試管和平皿，進(jìn)行編號(hào)。
第1組：取5.0mL中和劑，置20℃±1℃水浴中10min后，加入0.1mL試驗(yàn)菌懸液，混勻，作用10min，用中和劑做10倍系列稀釋?zhuān)x適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種于2個(gè)平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
第2組：取4.5mL中和劑于試管內(nèi)，加入0.5mL抗菌劑，混勻，置20℃±1℃水浴中10min制成中和產(chǎn)物，加入0.1mL試驗(yàn)菌懸液，混勻，作用10min，用中和產(chǎn)物做10倍系列稀釋?zhuān)x適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種于2個(gè)平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
第3組：取5.0mLPBS，置20℃±1℃水浴中10min，加入0.1mL試驗(yàn)菌懸液，混勻，作用10min，用PBS做10倍系列稀釋?zhuān)x適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種2個(gè)平皿，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
第4組：分別吸取稀釋液（PBS）、中和劑各1.0mL于同一無(wú)菌平皿內(nèi)，倒入上述試驗(yàn)同批次的培養(yǎng)基15mL～20mL，作為陰性對(duì)照組培養(yǎng)觀(guān)察。
5.2.1.4.3結(jié)果判定
第1、2、3組有相似量試驗(yàn)菌生長(zhǎng)，且菌量在1.0×104CFU/mL～9.0×104CFU/mL；計(jì)算組間菌落數(shù)誤差率，其組間菌落數(shù)誤差率應(yīng)不超過(guò)15%；第4組無(wú)菌生長(zhǎng)，否則，說(shuō)明試劑有污染，應(yīng)更換無(wú)污染的試劑重新進(jìn)行試驗(yàn)。
試驗(yàn)重復(fù)3次，每次試驗(yàn)均應(yīng)符合以上要求。
5.2.1.5試驗(yàn)步驟
取無(wú)菌試管，先加入5.0mL抗菌劑（說(shuō)明書(shū)規(guī)定的使用濃度），置20℃±1℃水浴中5min后，再加入0.1mL試驗(yàn)用菌懸液，迅速混勻并立即計(jì)時(shí)。
待試驗(yàn)菌與抗菌劑相互作用至各預(yù)定時(shí)間（以說(shuō)明書(shū)規(guī)定時(shí)間為T(mén)，時(shí)間分別為0.5T，T，1.5T），分別吸取0.5mL試驗(yàn)菌與抗菌劑混合液加于4.5mL中和劑中，混勻。
各管試驗(yàn)菌與抗菌劑混合液經(jīng)中和劑作用10min后，分別吸取1.0mL樣液，按活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法測(cè)定存活菌數(shù)，每管樣液接種2個(gè)平皿。如平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)較多時(shí)，可用PBS進(jìn)行10倍系列稀釋后，再進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
同時(shí)用PBS代替消毒液，進(jìn)行平行試驗(yàn)，作為陽(yáng)性對(duì)照。陽(yáng)性對(duì)照回收菌落數(shù)在1.0×104CFU/mL～9.0×104CFU/mL。取同批次稀釋液、中和劑、培養(yǎng)基作陰性對(duì)照。
所有試驗(yàn)樣本和對(duì)照樣本均在36℃±1℃培養(yǎng)，對(duì)細(xì)菌繁殖體培養(yǎng)48h觀(guān)察最終結(jié)果；對(duì)白色念珠菌需培養(yǎng)72h觀(guān)察最終結(jié)果。試驗(yàn)重復(fù)3次，計(jì)算殺菌率。
5.2.1.6結(jié)果判定
說(shuō)明書(shū)規(guī)定時(shí)間的殺菌率≥90%，判有抗菌作用；說(shuō)明書(shū)規(guī)定時(shí)間的殺菌率≥99%，判為較強(qiáng)抗菌作用。
5.2.2載體浸泡定量殺菌試驗(yàn)
5.2.2.1適用范圍
適用于粘稠狀（半固體）抗菌產(chǎn)品如抗菌洗手液、抗菌沐浴露、抗菌凝膠、膏狀抗菌產(chǎn)品等對(duì)微生物抗菌效果的鑒定。
5.2.2.2試劑、培養(yǎng)基及器材
中和劑（PBS配制），其它見(jiàn)5.1.2.2。
5.2.2.3染菌載體制備
取試驗(yàn)菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，用PBS稀釋至約5×106CFU/mL～5×107CFU/mL制成菌懸液備用。用微量移液器滴染10μl菌懸液于滅菌載體上，36℃±1℃烘干或室溫晾干備用。
5.2.2.4中和劑鑒定試驗(yàn)
5.2.2.4.1試驗(yàn)分組
第1組：5.0mL中和劑+染菌載體→培養(yǎng)
第2組：（含抗菌劑的載體+5.0mL中和劑）+染菌載體→培養(yǎng)
第3組：5.0mL稀釋液+染菌載體→培養(yǎng)
第4組：稀釋液+中和劑+培養(yǎng)基→培養(yǎng)
5.2.2.4.2試驗(yàn)步驟
根據(jù)試驗(yàn)分組，準(zhǔn)備試管和平皿，依次進(jìn)行編號(hào)。
第1組：取5.0mL中和劑于無(wú)菌平皿中，置20℃±1℃水浴5min，加入1片染菌載體，作用10min，取出菌片放入5.0mL中和劑試管內(nèi)，作用10min后，置渦旋振蕩器上振蕩1min或在手掌上用力振打80次，將試驗(yàn)菌洗下，用中和劑做10倍系列稀釋后，選擇適宜稀釋度，分別吸取1.0mL接種于2個(gè)平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
第2組：取5.0mL中和劑于無(wú)菌平皿內(nèi)，加入1片沾有抗菌樣本的載體，混勻，置20℃±1℃水浴作用10min制成中和產(chǎn)物。再用無(wú)菌鑷子取1片染菌載體，浸于中和產(chǎn)物中作用10min后，用無(wú)菌鑷子取出染菌載體移入含5.0mL中和產(chǎn)物試管中，作用10min，振蕩，將試驗(yàn)菌洗下，用中和產(chǎn)物做10倍系列稀釋,選適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種于2個(gè)平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
第3組：取5.0mLPBS于無(wú)菌平皿中，置20℃±1℃水浴5min，加入1片染菌載體，作用10min，取出菌片放入5.0mLPBS試管內(nèi)，作用10min后，振蕩，將試驗(yàn)菌洗下，用PBS做10倍系列稀釋,選適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種于2個(gè)平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
第4組：分別吸取稀釋液（PBS）與中和劑各1.0mL于同一無(wú)菌平皿內(nèi)，倒入同批次的培養(yǎng)基15～20mL，培養(yǎng)觀(guān)察。
5.2.2.4.3結(jié)果判定
第1、2和3組有相似量試驗(yàn)菌生長(zhǎng)，且菌量在1.0×104CFU/片～9.0×104CFU/片。計(jì)算組間菌落數(shù)誤差率，其組間菌落數(shù)誤差率應(yīng)不超過(guò)15%。第4組無(wú)菌生長(zhǎng),否則，說(shuō)明試劑有污染，應(yīng)更換無(wú)污染的試劑重新進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)重復(fù)3次，每次試驗(yàn)均應(yīng)符合以上要求。
5.2.2.5試驗(yàn)步驟
按5g/片的量稱(chēng)取抗菌樣品于無(wú)菌平皿內(nèi)，置20℃±1℃水浴5min，用無(wú)菌鑷子取染菌載體，使載體完全浸沒(méi)于抗菌樣品中，立即計(jì)時(shí)。
待染菌載體與抗菌劑相互作用至各預(yù)定時(shí)間（以說(shuō)明書(shū)規(guī)定時(shí)間為T(mén)，時(shí)間分別為0.5T，T，1.5T），分別取染菌載體加入5.0mL中和劑試管中，混勻。
經(jīng)中和劑作用10min后，振蕩，將試驗(yàn)菌洗下，分別吸取1.0mL樣液，按活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法測(cè)定存活菌數(shù)，每管樣液接種2個(gè)平皿。如平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)較多時(shí)，可用PBS進(jìn)行系列10倍稀釋后，再進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
取與試驗(yàn)樣品同質(zhì)材料不含抗菌成分的對(duì)照樣品代替抗菌樣品浸泡2片染菌載體，進(jìn)行平行試驗(yàn)，作為陽(yáng)性對(duì)照。陽(yáng)性對(duì)照回收菌量為1.0×104CFU/片～9.0×104CFU/片。取同批次稀釋液、中和劑、培養(yǎng)基作陰性對(duì)照。
所有試驗(yàn)樣本和對(duì)照樣本均在36℃±1℃培養(yǎng)，細(xì)菌繁殖體培養(yǎng)48h觀(guān)察結(jié)果；白色念珠菌培養(yǎng)72h觀(guān)察結(jié)果。試驗(yàn)重復(fù)3次，計(jì)算殺菌率。
5.2.2.6結(jié)果判定
說(shuō)明書(shū)規(guī)定時(shí)間的殺菌率≥90%，判有抗菌作用；說(shuō)明書(shū)規(guī)定時(shí)間的殺菌率≥99%，判有較強(qiáng)抗菌作用。
5.2.3載體殺菌試驗(yàn)
5.2.3.1適用范圍
適用于添加有殺菌劑的衛(wèi)生濕巾或可溶性抗菌物質(zhì)的載體類(lèi)產(chǎn)品的抗菌性能效果的鑒定。
5.2.3.2試劑、培養(yǎng)基及器材
中和劑（PBS配制），其它見(jiàn)5.1.1.2
5.2.3.3菌懸液配制及樣片制備
取試驗(yàn)菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，用PBS稀釋至1.0×105CFU/mL～9.0×105CFU/mL，制成菌懸液備用。
用無(wú)菌剪刀將抗菌產(chǎn)品和材質(zhì)相同但不含抗菌成分的對(duì)照樣品分別剪成20mm×30mm樣片備用。試驗(yàn)時(shí)滴加0.1mL菌懸液。對(duì)照樣片染菌前需經(jīng)121℃15min滅菌處理。
5.2.3.4中和劑鑒定試驗(yàn)
5.2.3.4.1試驗(yàn)分組
第1組：5.0mL中和劑+染菌對(duì)照樣片→培養(yǎng)
第2組：（5.0mL中和劑+抗菌樣片）+染菌對(duì)照樣片→培養(yǎng)
第3組：5.0mL稀釋液+染菌對(duì)照樣片→培養(yǎng)
第4組：稀釋液+中和劑+培養(yǎng)基→培養(yǎng)
5.2.3.4.2試驗(yàn)步驟
根據(jù)試驗(yàn)分組，準(zhǔn)備試管和平皿，依次進(jìn)行編號(hào)。
第1組：取5.0mL中和劑于無(wú)菌試管內(nèi)，置20℃±1℃水浴5min，用無(wú)菌鑷子取1片染菌對(duì)照樣片加入試管內(nèi)，作用10min，振蕩將試驗(yàn)菌洗下，用中和劑做10倍系列稀釋后選擇適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種于2個(gè)平皿中，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
第2組：取5.0mL中和劑于無(wú)菌試管內(nèi)，用無(wú)菌鑷子取1片抗菌樣片加入試管內(nèi)，振蕩混勻置20℃±1℃水浴作用10min制成中和產(chǎn)物，再夾入1片染菌對(duì)照樣片，作用10min，振蕩將試驗(yàn)菌洗下，用中和產(chǎn)物做10倍系列稀釋?zhuān)x擇適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種2個(gè)平皿，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
第3組：取5.0mLPBS于無(wú)菌試管內(nèi)，置20℃±1℃水浴5min，用無(wú)菌鑷子取1片染菌對(duì)照樣片加入試管內(nèi)，作用10min，振蕩將試驗(yàn)菌洗下，用PBS做10倍系列稀釋后選擇適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種2個(gè)平皿，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
第4組：分別吸取稀釋液與中和劑各1.0mL于同一無(wú)菌平皿內(nèi)，傾注同批次的培養(yǎng)基15mL～20mL，培養(yǎng)觀(guān)察。
5.2.3.4.3結(jié)果判定
第1、2和3組有相似量試驗(yàn)菌生長(zhǎng)，且菌量在1.0×104CFU/片～9.0×104CFU/片。計(jì)算組間菌落數(shù)誤差率，其組間菌落數(shù)誤差率應(yīng)不超過(guò)15%。第4組無(wú)菌生長(zhǎng)，否則，說(shuō)明試劑有污染，應(yīng)更換無(wú)污染的試劑重新進(jìn)行試驗(yàn)。
試驗(yàn)重復(fù)3次，每次試驗(yàn)均應(yīng)符合以上要求。
5.2.3.5試驗(yàn)步驟
取無(wú)菌平皿，用無(wú)菌鑷子取3片試驗(yàn)樣片，勿重疊，置20℃±1℃水浴5min，在每一樣片上滴加0.1mL試驗(yàn)用菌懸液，立即計(jì)時(shí)。
待試驗(yàn)菌與樣片相互作用至各預(yù)定時(shí)間（以說(shuō)明書(shū)規(guī)定時(shí)間為T(mén)，時(shí)間分別為0.5T，T，1.5T），分別夾取染菌樣片加于5.0mL中和劑試管中，混勻。
經(jīng)中和劑作用10min后，振蕩將試驗(yàn)菌洗下，分別吸取1.0mL樣液，按活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法測(cè)定存活菌數(shù)，每管樣液接種2個(gè)平皿。如平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)較多時(shí)，可10倍系列稀釋后，再進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
同時(shí)用不含殺菌成分，其他成分相同的對(duì)照樣片2片代替試驗(yàn)樣片，進(jìn)行平行試驗(yàn)，作為陽(yáng)性對(duì)照。陽(yáng)性對(duì)照回收菌落數(shù)在1.0×104CFU/片～9.0×104CFU/片。取試驗(yàn)同批次稀釋液、中和劑、培養(yǎng)基作陰性對(duì)照。
所有試驗(yàn)樣本和對(duì)照樣本均在36℃±1℃培養(yǎng)，細(xì)菌繁殖體培養(yǎng)48h、白色念珠菌需培養(yǎng)72h觀(guān)察最終結(jié)果。試驗(yàn)重復(fù)3次，計(jì)算殺菌率。
5.2.3.6殺菌率計(jì)算
見(jiàn)5.2.2.6。
5.2.3.7結(jié)果判定
說(shuō)明書(shū)規(guī)定時(shí)間的殺菌率≥90%，判有抗菌作用；說(shuō)明書(shū)規(guī)定時(shí)間的殺菌率≥99%，判有較強(qiáng)抗菌作用。
5.2.4浸漬殺菌試驗(yàn)
5.2.4.1適用范圍
適用于抗菌毛巾、抗菌棉襪、抗菌棉布、抗菌紗布口罩等含有溶出性抗菌材料的抗菌織物對(duì)微生物抗菌效果的試驗(yàn)。
5.2.4.2試劑、培養(yǎng)基及器材
中和劑（PBS配制，針對(duì)樣品中所含可溶性抗菌成分進(jìn)行中和劑鑒定試驗(yàn)），其它見(jiàn)5.1.5.2
5.2.4.3試驗(yàn)步驟
分別取1mL菌懸液加入2份準(zhǔn)備好的錐形瓶?jī)?nèi)試樣和1份對(duì)照織物上，確保其均勻分布，且錐形瓶中不留多余液，封好瓶口，以防蒸發(fā)，造成細(xì)菌死亡。
分別在一個(gè)盛有已接種菌懸液的試樣和對(duì)照織物的錐形瓶中加入100mL中和劑，置渦旋振蕩器上振蕩1min洗滌細(xì)菌，取1.0mL做10倍系列稀釋?zhuān)x適當(dāng)稀釋度以?xún)A注法接種平皿，作為“0”接觸時(shí)間樣本和對(duì)照織物上的細(xì)菌數(shù)。
將另一個(gè)裝有已接種菌懸液試樣的錐形瓶于36℃±1℃培養(yǎng)20h±2h，加入100mL中和劑，置渦旋振蕩器上振蕩1min洗滌細(xì)菌，取1.0mL做10倍系列稀釋?zhuān)x適當(dāng)稀釋度以?xún)A注法接種平皿，作為試驗(yàn)組。
陰性對(duì)照組：試樣不接種菌懸液，在“0”接觸時(shí)間加入100mL中和劑，置渦旋振蕩器上振蕩1min取樣，接種平皿。
陽(yáng)性對(duì)照組：另取1個(gè)裝有對(duì)照織物的錐形燒瓶，接種1mL菌懸液后，在36℃±1℃培養(yǎng)20h±2h，加入100mLPBS，置渦旋振蕩器上振蕩1.0min洗滌細(xì)菌，取1.0mL做10倍系列稀釋?zhuān)x適當(dāng)稀釋度以?xún)A注法接種平皿。
將陰性和陽(yáng)性對(duì)照樣本與試驗(yàn)組樣本一并放36℃±1℃培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。試驗(yàn)重復(fù)3次。
5.2.4.4結(jié)果判定
“0”接觸時(shí)間對(duì)照織物的平均菌落數(shù)應(yīng)在1.0×103CFU/mL～5.0×103CFU/mL。
陰性對(duì)照應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)，陽(yáng)性對(duì)照菌數(shù)比0接觸時(shí)間的菌數(shù)明顯增加。
各次試驗(yàn)的殺菌率均≥90%，即可認(rèn)定該樣品具有抗菌作用；殺菌率≥99%，判有較強(qiáng)抗菌作用。
5.2.5振蕩燒瓶試驗(yàn)
5.2.5.1適用范圍
適用于添加有非溶出性抗菌物質(zhì)的抗菌產(chǎn)品對(duì)微生物抗菌效果的鑒定。
注1：在進(jìn)行振蕩燒瓶試驗(yàn)前，需要鑒定其抗菌成分是否可溶出，如果有溶出性抗菌材料，參照可溶出抗菌材料檢測(cè)，無(wú)溶出性抗菌材料，可選用振蕩燒瓶法進(jìn)行。
注2：非溶出性抗菌材料的鑒定：將樣品置于無(wú)菌蒸餾水浸泡24h，取浸泡液參照5.1.1檢驗(yàn)是否有抑菌效果，或?qū)悠凡贸芍睆?mm圓片參照5.1.4檢驗(yàn)是否有抑菌環(huán)。如果無(wú)抑菌效果，說(shuō)明樣品屬非溶出性抗菌材料，進(jìn)行振蕩燒瓶試驗(yàn)。
5.2.5.2試劑、培養(yǎng)基及器材
搖床，天平，其它見(jiàn)5.1.1.2
5.2.5.3試驗(yàn)步驟
5.2.5.3.1對(duì)于抗菌無(wú)紡布口罩、衛(wèi)生巾、衛(wèi)生護(hù)墊、尿布、尿不濕、無(wú)紡布一次性?xún)?nèi)褲等產(chǎn)品，對(duì)微生物抑菌效果的試驗(yàn)方法參照GB15979進(jìn)行。
結(jié)果判定：不加樣片組的菌落數(shù)在1.0×104CFU/mL～9.0×104CFU/mL，且樣品振蕩前后平均菌落數(shù)差值在10%以?xún)?nèi)，試驗(yàn)有效；被試樣片組抑菌率與對(duì)照樣片組抑菌率的差值≥26%，判產(chǎn)品具有抗菌作用。
5.2.5.3.2對(duì)于抗菌毛巾、抗菌棉襪、抗菌棉布、抗菌紗布口罩等含非溶出性抗菌材料的針織類(lèi)抗菌織物對(duì)微生物抗菌效果按照FZ/T73023標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)和評(píng)價(jià)。
5.2.6貼膜試驗(yàn)
5.2.6.1適用范圍
適用于PE抗菌底模、PE打孔膜及PE抗菌包裝袋、抗菌塑料、抗菌地板、抗菌瓷磚等產(chǎn)品抗菌效果測(cè)定。通過(guò)將細(xì)菌污染于樣品表面，然后用塑料薄膜覆蓋，使細(xì)菌與樣品表面充分接觸，以測(cè)定其抗菌效果。
5.2.6.2試劑、培養(yǎng)基及試驗(yàn)器材
5.2.6.2.1試驗(yàn)菌株
金黃色葡萄球菌（ATCC6538）、大腸桿菌（8099）、白色念珠菌（ATCC10231），也可根據(jù)抗菌用品特定用途選用其他菌株。
5.2.6.2.2試劑
pH7.2～7.4的0.03mol/LPBS，營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，沙氏瓊脂培養(yǎng)基，沙氏液體培養(yǎng)基。
5.2.6.2.3試驗(yàn)器材
薄膜為不影響細(xì)菌生長(zhǎng)和不吸水的材料，厚度不規(guī)定，使用面應(yīng)有較好的粘合性，邊長(zhǎng)為40mm±2mm的正方形；無(wú)菌塑料袋、樣片：將試樣及對(duì)照試樣（與試樣同質(zhì)不含抗菌組分）分別制成邊長(zhǎng)為50mm±2mm的正方形，其中抗菌樣片3個(gè)，對(duì)照樣片6個(gè)。
5.2.6.3實(shí)驗(yàn)步驟
將試驗(yàn)菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下制成菌懸液。將菌懸液用1/500的營(yíng)養(yǎng)肉湯稀釋成2.5×105CFU/mL～1.0×106CFU/mL試驗(yàn)用菌懸液。
將樣片試驗(yàn)面朝上放于無(wú)菌平皿中，取0.4mL菌懸液滴染于樣片中央，涂勻。薄膜覆蓋，小心觸壓薄膜，使菌液均勻散開(kāi)，以免菌液溢出薄膜外。蓋上平皿蓋。同時(shí)取對(duì)照樣片放于無(wú)菌平皿中，取0.4mL菌懸液滴染于樣片中央，涂勻。按試驗(yàn)樣片方法用薄膜覆蓋，蓋上平皿蓋。
將裝有接種過(guò)菌液的試驗(yàn)樣片和對(duì)照樣片的平皿（3個(gè)抗菌樣片和3個(gè)對(duì)照樣片），置36℃±1℃、相對(duì)濕度不低于90%的條件下培養(yǎng)24h。
以無(wú)菌操作方式用鑷子將覆蓋膜和樣片放入無(wú)菌塑料袋中，然后加入10mL肉湯培養(yǎng)液，用手充分揉搓袋中的樣片和覆蓋薄膜，將細(xì)菌洗下。
吸取1mL洗下的菌液，取適當(dāng)稀釋度接種2個(gè)平皿，加入15mL～20mL營(yíng)養(yǎng)瓊脂，待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿使底向上，置36℃±1℃培養(yǎng)48h。
將另3個(gè)對(duì)照樣片“0”時(shí)間接種菌液后，立即用鑷子將覆蓋膜和樣片放入塑料袋中，洗脫和接種方法與試驗(yàn)樣片相同；以試驗(yàn)用同批次稀釋液接種培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照，試驗(yàn)重復(fù)3次。
5.2.6.4結(jié)果的計(jì)算與判定
5.2.6.5.1試驗(yàn)成立條件
各次試驗(yàn)陰性對(duì)照均無(wú)菌生長(zhǎng)；對(duì)照樣片接種后直接求出活菌數(shù)的對(duì)數(shù)值應(yīng)：
式中：
L最大值—最大活菌數(shù)的對(duì)數(shù)值；
L最小值—最小活菌數(shù)的對(duì)數(shù)值；
L平均值—平均活菌數(shù)的對(duì)數(shù)值；
對(duì)照樣片“0”時(shí)間接種后的活菌數(shù)平均值不少于1.0×105CFU/樣片；覆蓋了薄膜的對(duì)照樣片培養(yǎng)24h后的活菌數(shù)不少于1.0×104CFU/樣片。
5.2.6.5.2結(jié)果判定
各次試驗(yàn)抗菌活性值均≥1.0，可判定該試樣具有抗菌作用；各次試驗(yàn)抗菌活性值均≥2.0，可判定該試樣具有較強(qiáng)抗菌作用。
5.2.7持續(xù)抗菌試驗(yàn)
5.2.7.1適用范圍
適用于具有長(zhǎng)效抗菌作用產(chǎn)品抗菌效果的鑒定。
5.2.7.2試劑、培養(yǎng)基及器材
試驗(yàn)菌株：金黃色葡萄球菌(ATCC6538)、大腸桿菌(8099)、黑曲霉菌(ATCC16404)等
載體：布片、玻片、不銹鋼片等
試劑：稀釋液（含0.01%吐溫80的0.03mol/L的PBS）、中和劑（PBS配制）、營(yíng)養(yǎng)瓊脂、麥芽浸膏瓊脂等。
5.2.7.3試驗(yàn)步驟
5.2.7.3.1長(zhǎng)效抗菌劑樣片的制備：
根據(jù)長(zhǎng)效抗菌劑所用載體，如木板、金屬板、塑料板等裁成50mm×50mm，制備抗菌樣片。按照抗菌劑涂抹要求，將抗菌劑涂布于樣片表面，室溫干燥備用，作為實(shí)驗(yàn)組；未經(jīng)任何處理的樣片（經(jīng)壓力蒸汽滅菌處理）作為對(duì)照組；兩組樣片在室溫下存放于實(shí)驗(yàn)室。
5.2.7.3.2中和劑鑒定試驗(yàn)
以長(zhǎng)效抗菌劑進(jìn)行中和劑鑒定試驗(yàn)，方法見(jiàn)5.2.1.4。
5.2.7.3.3長(zhǎng)效抗菌實(shí)驗(yàn)步驟
實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)：兩組樣片于室溫存放至長(zhǎng)效抗菌劑說(shuō)明書(shū)規(guī)定的持續(xù)作用時(shí)間（如7d，15d和30d等），后，取出實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組進(jìn)行試驗(yàn)。將24h新鮮培養(yǎng)的菌懸液染到載體上，實(shí)驗(yàn)組染菌載體作用至說(shuō)明書(shū)規(guī)定時(shí)間后（如2.5min、5min、10min、20min等）投入中和劑中，混勻后稀釋接種；同時(shí)用對(duì)照組樣片染菌進(jìn)行平行試驗(yàn)，對(duì)照組染菌載體在相同時(shí)間投入稀釋液中，混勻后稀釋接種。細(xì)菌繁殖體36℃±1℃培養(yǎng)48h、黑曲霉菌30℃±1℃培養(yǎng)72h觀(guān)察最終結(jié)果，對(duì)照載體染菌后的回收菌量在1.0×104CFU/片～9.0×104CFU/片。取試驗(yàn)同批次稀釋液、中和劑、培養(yǎng)基作陰性對(duì)照。試驗(yàn)重復(fù)3次，計(jì)算殺菌率。
現(xiàn)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)：選擇病房或其他公共場(chǎng)所表面作為試驗(yàn)現(xiàn)場(chǎng)，選擇相似場(chǎng)所一組作為對(duì)照組，一組作為實(shí)驗(yàn)組。對(duì)照組不做任何處理，試驗(yàn)組噴涂抗菌劑，對(duì)照組以常規(guī)方式清潔消毒，實(shí)驗(yàn)組噴涂抗菌劑后，日常僅清水擦拭，至規(guī)定時(shí)間（長(zhǎng)效時(shí)間如7d，15d、30d）后進(jìn)行采樣。對(duì)照組用無(wú)菌棉簽沾稀釋液采樣，實(shí)驗(yàn)組用無(wú)菌棉簽沾中和劑采樣，采樣面積為50cm2，對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組均為30個(gè)樣本。所有試驗(yàn)樣本和對(duì)照樣本經(jīng)適當(dāng)稀釋接種后，36℃±1℃培養(yǎng)48h觀(guān)察結(jié)果，計(jì)算殺菌率。
5.2.7.4結(jié)果判定
殺菌率≥90%，判在該段時(shí)間內(nèi)具有持續(xù)抗菌作用。
以上內(nèi)容為WST 650-2019抗菌和抑菌效果評(píng)價(jià)方法政策文件的全部?jī)?nèi)容，此政策實(shí)施日期，相關(guān)企業(yè)需要根據(jù)要求做好抗抑菌劑產(chǎn)品備案檢測(cè)，健明迪檢測(cè)，專(zhuān)注消毒產(chǎn)品備案，提供CMA資質(zhì)認(rèn)證檢驗(yàn)報(bào)告。
5.1抑菌效果
5.1.1懸液定量抑菌試驗(yàn)
5.1.1.1適用范圍
適用于液體抑菌制劑如衛(wèi)生洗液、抑菌噴霧劑等對(duì)微生物抑菌效果的測(cè)定。
5.1.1.2試劑、培養(yǎng)基及器材
5.1.1.2.1試驗(yàn)菌株
金黃色葡萄球菌（ATCC6538）、大腸桿菌（8099）、白色念珠菌（ATCC10231）及根據(jù)抑菌劑特定用途所用的其他菌株。
5.1.1.2.2試劑
稀釋液：0.03mol/L磷酸鹽緩沖液（PBS）（pH7.2～7.4），培養(yǎng)基：金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的培養(yǎng)使用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，白色念珠菌的培養(yǎng)使用沙氏瓊脂培養(yǎng)基。
5.1.1.2.3器材
恒溫水浴箱、計(jì)時(shí)器、Ⅱ級(jí)生物安全柜等。
5.1.1.3試驗(yàn)步驟
取試驗(yàn)菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，用PBS稀釋至約5.0×105CFU/mL～4.5×106CFU/mL菌懸液備用。取無(wú)菌試管，先加入5.0mL樣品（根據(jù)使用說(shuō)明書(shū)要求使用原液或稀釋液），置20℃±1℃水浴中5min后，再加入0.1mL試驗(yàn)用菌懸液，迅速混勻并立即計(jì)時(shí)。待試驗(yàn)菌與樣品相互作用至說(shuō)明書(shū)的規(guī)定時(shí)間，分別吸取1.0mL試驗(yàn)菌與樣品混合液接種2個(gè)平皿，傾注培養(yǎng)基。菌量無(wú)法計(jì)數(shù)時(shí)，以PBS做10倍系列稀釋?zhuān)x適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種2個(gè)平皿，做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。同時(shí)用PBS代替樣品，進(jìn)行平行試驗(yàn)，作為陽(yáng)性對(duì)照。陽(yáng)性對(duì)照回收菌落數(shù)在1.0×104CFU/mL～9.0×104CFU/mL之間。取同批次PBS、培養(yǎng)基作陰性對(duì)照。所有試驗(yàn)樣本和對(duì)照樣本均在36℃±1℃培養(yǎng)，細(xì)菌繁殖體培養(yǎng)48h觀(guān)察最終結(jié)果；白色念珠菌培養(yǎng)72h觀(guān)察最終結(jié)果。試驗(yàn)重復(fù)3次，計(jì)算抑菌率。
5.1.1.4結(jié)果判定
抑菌率≥50%～90%，判有抑菌作用；抑菌率≥90%，判有較強(qiáng)抑菌作用。
5.1.2載體浸泡定量抑菌試驗(yàn)
5.1.2.1適用范圍
適用于膏體或半固體凝膠類(lèi)、黏稠狀抑菌產(chǎn)品對(duì)微生物抑菌效果的測(cè)定。
5.1.2.2試劑、培養(yǎng)基及器材
載體為10mm×10mm脫脂白平紋布片，脫脂方法依照《消毒技術(shù)規(guī)范》（2002版）進(jìn)行，使用前壓力蒸汽滅菌備用，電子天平（d=0.01g），其它同5.1.1.2。
5.1.2.3操作步驟
取試驗(yàn)菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，用PBS稀釋至約5.0×106CFU/mL～5.0×107CFU/mL制成菌懸液備用。用微量移液器滴染10μl菌懸液于滅菌載體上，36℃±1℃烘干或室溫晾干備用。
按5g/片的量稱(chēng)取樣品于無(wú)菌平皿內(nèi)，置20℃±1℃水浴5min，用無(wú)菌鑷子取染菌載體，使載體完全浸沒(méi)于樣品中，立即計(jì)時(shí)。待染菌載體與樣品相互作用至說(shuō)明書(shū)的規(guī)定時(shí)間，分別取染菌載體加入5.0mLPBS試管中，混勻，振蕩，將試驗(yàn)菌洗下，分別吸取1.0mL樣液，按活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法測(cè)定存活菌數(shù)，每管樣液接種2個(gè)平皿。如平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)較多時(shí)，可用PBS進(jìn)行10倍系列稀釋后，再進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。取10.0g與試驗(yàn)樣品同質(zhì)材料不含抑菌成分的對(duì)照樣品浸泡2片染菌載體進(jìn)行平行試驗(yàn)，作為陽(yáng)性對(duì)照。陽(yáng)性對(duì)照回收菌量為1.0×104CFU/片～9.0×104CFU/片。取同批次PBS、培養(yǎng)基作陰性對(duì)照。所有試驗(yàn)樣本和對(duì)照樣本均在36℃±1℃培養(yǎng)，細(xì)菌繁殖體培養(yǎng)48h觀(guān)察結(jié)果；白色念珠菌培養(yǎng)72h觀(guān)察結(jié)果。試驗(yàn)重復(fù)3次，計(jì)算抑菌率。
5.1.2.4結(jié)果判定
抑菌率≥50%～90%，判有抑菌作用；抑菌率≥90%，判有較強(qiáng)抑菌作用。
5.1.3載體抑菌試驗(yàn)
5.1.3.1適用范圍
適用于含溶出性抑菌成分的濕巾、無(wú)紡布口罩、衛(wèi)生巾、護(hù)墊、尿布等固體類(lèi)抑菌產(chǎn)品對(duì)微生物抑菌效果的測(cè)定。
5.1.3.2試劑、培養(yǎng)基及器材
見(jiàn)5.1.1.2。
5.1.3.3試驗(yàn)步驟
取試驗(yàn)菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，用PBS稀釋至約105CFU/mL～106CFU/mL，制成菌懸液備用。用滅菌剪刀在無(wú)菌條件下將試驗(yàn)樣品和對(duì)照樣品分別剪成20mm×30mm樣片備用。試驗(yàn)時(shí)滴加0.1mL菌懸液。對(duì)照樣片染菌前需經(jīng)壓力蒸汽滅菌。取無(wú)菌平皿，用無(wú)菌鑷子取2片試驗(yàn)樣片，勿重疊，置20℃±1℃水浴5min，在每一樣片上滴加0.1mL試驗(yàn)用菌懸液，立即計(jì)時(shí)。待試驗(yàn)菌與樣片接觸作用至說(shuō)明書(shū)的規(guī)定時(shí)間，分別夾取染菌樣片加于5.0mLPBS試管中，混勻。振蕩洗脫，分別吸取1.0mL樣液，按活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法測(cè)定存活菌數(shù)，每管樣液接種2個(gè)平皿。如平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)較多時(shí)，可10倍系列稀釋后，再進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。同時(shí)用與試驗(yàn)樣品同質(zhì)材料不含抑菌成分的對(duì)照樣片2片代替試驗(yàn)樣片進(jìn)行試驗(yàn)，作為陽(yáng)性對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照回收菌量為1.0×104CFU/片～9.0×104CFU/片；取同批次PBS、培養(yǎng)基作陰性對(duì)照。
所有試驗(yàn)樣本和對(duì)照樣本均在36℃±1℃培養(yǎng)，細(xì)菌繁殖體培養(yǎng)48h、白色念珠菌培養(yǎng)72h觀(guān)察最終結(jié)果。試驗(yàn)重復(fù)3次，計(jì)算抑菌率。
5.1.3.4抑菌率計(jì)算
見(jiàn)式（2）。
5.1.3.5結(jié)果判定
抑菌率≥50%～90%，判有抑菌作用；抑菌率≥90%，判有較強(qiáng)抑菌作用。
5.1.4抑菌環(huán)試驗(yàn)
5.1.4.1適用范圍
適用于含溶出性抑菌物質(zhì)，可制成直徑為5mm片狀物的固體抑菌產(chǎn)品的抑菌效果鑒定；也可用于鑒別抗抑菌樣品中是否含有可溶性抑菌物質(zhì)。
5.1.4.2試劑、培養(yǎng)基及器材
游標(biāo)卡尺，其它見(jiàn)5.1.1.2
5.1.4.3試驗(yàn)步驟
將試驗(yàn)菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，稀釋至5.0×105CFU/mL～5.0×106CFU/mL備用。
抑菌片的制備：溶出性固體抑菌產(chǎn)品，直接制成直徑為5mm，厚度不超過(guò)4mm圓片（塊），每4片為一組。陰性對(duì)照樣片的制備：取同種材質(zhì)不含抑菌成分的樣本，制成與試驗(yàn)組大小相同的圓片（塊）。
用無(wú)菌棉拭子蘸取濃度為5.0×105CFU/mL～5.0×106CFU/mL試驗(yàn)菌懸液，在適宜的培養(yǎng)基平板表面均勻涂抹3次。每涂抹1次，平板應(yīng)轉(zhuǎn)動(dòng)60°，最后將棉拭子繞平板邊緣涂抹一周。蓋好平皿，置室溫干燥5min。
每次試驗(yàn)貼放1個(gè)染菌平板，每個(gè)平板貼放4片試驗(yàn)樣片，1片陰性對(duì)照樣片，共5片。用無(wú)菌鑷子取樣片貼放于平板表面，陰性對(duì)照樣片貼于平板中心位置，試驗(yàn)樣片貼于四周，貼放好后，用無(wú)菌鑷子輕壓樣片，使其緊貼于平板表面。各樣片中心之間相距25mm以上，與平板的周緣相距15mm以上。蓋好平板，置36℃±1℃培養(yǎng)16h～18h觀(guān)察結(jié)果，試驗(yàn)重復(fù)3次。
用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌環(huán)的直徑（包括貼片）并記錄，測(cè)量抑菌環(huán)時(shí)，應(yīng)選均勻而完全無(wú)菌生長(zhǎng)的抑菌環(huán)進(jìn)行，測(cè)量其直徑應(yīng)以抑菌環(huán)外沿為界。
5.1.4.4結(jié)果判定
陰性對(duì)照樣片應(yīng)無(wú)抑菌環(huán)產(chǎn)生，試驗(yàn)樣品抑菌環(huán)直徑＞7mm者，判為有抑菌作用；抑菌環(huán)直徑≤7mm者，判為無(wú)抑菌作用。
3次重復(fù)試驗(yàn)（共12個(gè)樣片）均有抑菌作用，則判為合格。
5.1.5浸漬抑菌試驗(yàn)
5.1.5.1適用范圍
適用于溶出性抑菌織物（如抑菌毛巾、口罩、內(nèi)衣等）抑菌效果的測(cè)定。
5.1.5.2試劑、培養(yǎng)基及器材
5.1.5.2.1試驗(yàn)菌株見(jiàn)5.1.1.2.1
5.1.5.2.2試樣
在距試樣布邊10cm以上、離布端1m以上部位，剪取直徑為5cm的圓形試樣若干，取3份試樣分別裝于3個(gè)錐形瓶中，蓋好瓶口備用（需用試樣數(shù)量要根據(jù)纖維類(lèi)別及織物織法而定，以能吸收1mL菌液且錐形瓶中不留殘液為度）。另同法剪取與試樣相同材質(zhì)但不含抑菌劑對(duì)照織物若干，取2份分別裝于2個(gè)錐形瓶中，蓋好瓶口，121℃滅菌15min備用。
5.1.5.2.3試劑和培養(yǎng)基
0.03mol/LPBS（pH7.2～7.4），肉湯培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、沙氏培養(yǎng)基。
5.1.5.2.4菌懸液的制備
用接種環(huán)將保存的菌種以劃線(xiàn)法接種到營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，36℃±1℃培養(yǎng)24h，取典型的菌落移種到含肉湯培養(yǎng)基的錐形瓶中，36℃±1℃培養(yǎng)24h，用肉湯對(duì)培養(yǎng)液進(jìn)行系列稀釋?zhuān)咕鷳乙旱暮繛?.0×105CFU/mL～5.0×105CFU/mL。
5.1.5.3試驗(yàn)步驟
分別取1mL菌懸液加入2份準(zhǔn)備好的錐形瓶?jī)?nèi)試樣和1份對(duì)照織物上，確保其均勻分布，且錐形瓶中不留多余液，封好瓶口，以防蒸發(fā)造成細(xì)菌死亡。分別在一個(gè)盛有已接種菌懸液的試樣和對(duì)照織物的錐形瓶中加入100mLPBS，置渦旋振蕩器上振蕩1min洗滌細(xì)菌，分別吸取1.0mL樣液或10倍系列稀釋液接種2個(gè)平皿，作為“0”接觸時(shí)間樣本和對(duì)照織物上的細(xì)菌數(shù)。
將另一個(gè)裝有已接種菌懸液試樣的錐形瓶于36℃±1℃培養(yǎng)20h±2h，加入100mLPBS，置渦旋振蕩器上振蕩1min洗滌細(xì)菌，分別吸取1.0mL樣液或10倍系列稀釋液接種2個(gè)平皿，作為試驗(yàn)組。
陰性對(duì)照組，試樣不接種菌懸液，在“0”接觸時(shí)間加入100mLPBS，置渦旋振蕩器上振蕩1min取樣，接種平皿。
陽(yáng)性對(duì)照組，另取1個(gè)裝有對(duì)照織物的錐形燒瓶，接種1mL菌懸液后，在36℃±1℃培養(yǎng)20h±2h，加入100mLPBS，置渦旋振蕩器上振蕩1min洗滌細(xì)菌，分別吸取1.0mL樣液或10倍系列稀釋液接種2個(gè)平皿。將陰性和陽(yáng)性對(duì)照樣本與試驗(yàn)組樣本一并放36℃±1℃培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)，試驗(yàn)重復(fù)3次。
5.1.5.4結(jié)果判定
試驗(yàn)成立條件要求：“0”接觸時(shí)間對(duì)照織物的平均回收菌量為1×103CFU/mL～5×103CFU/mL；陰性對(duì)照應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)，陽(yáng)性對(duì)照菌數(shù)比0接觸時(shí)間的菌數(shù)明顯增加。
各次試驗(yàn)的抑菌率均≥50%，即可判定該樣片具有抑菌作用。
5.1.6滯留抑菌效果試驗(yàn)
5.1.6.1適用范圍
適用于有持續(xù)抑菌作用的抑菌洗液類(lèi)抑菌產(chǎn)品的滯留抑菌效果鑒定。
5.1.6.2試劑、培養(yǎng)基及試驗(yàn)器材
試驗(yàn)菌株：金黃色葡萄球菌（ATCC27217）
試驗(yàn)產(chǎn)品:試驗(yàn)品為25套按順序編號(hào)的樣品。每套2瓶，一瓶為測(cè)試樣品，另一瓶為不含抗（抑）菌劑的對(duì)照樣品。
不含抑菌劑的用品25瓶（試驗(yàn)調(diào)整階段用）。
胰蛋白酶大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB）、胰蛋白酶大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA）、羊血、經(jīng)脫纖維處理、0.075mol/L的磷酸鹽緩沖液、70%酒精、金屬筒（直徑2.2cm、高度3cm）、一次性接種環(huán)（直徑4mm）、小塑料碗（直徑2.2cm，高2.5mm,）、膠帶（Darapore,3M公司生產(chǎn)）、尼龍刮菌棒、聚乙二醇單辛基苯基醚(曲拉通X-100；Triton-X100)500mL、外用抗生素軟膏、玻璃彎棒、皮膚消毒劑等。
5.1.6.3試驗(yàn)步驟
5.1.6.3.1調(diào)整階段
試驗(yàn)開(kāi)始前7d至14d，受試者使用不含抗（抑）菌成分的香皂、洗發(fā)水和沐浴液進(jìn)行日常的洗手、洗澡，此階段持續(xù)至少7d，但不超過(guò)14d。
5.1.6.3.2清洗階段
清洗階段共3d，受試者每天用有持續(xù)抑菌作用的抑菌洗液類(lèi)樣品清洗一側(cè)前臂,用對(duì)照樣品清洗另一側(cè)前臂，清洗過(guò)程如下:
先清洗左臂，用水溫為35℃～37℃的流動(dòng)水潤(rùn)濕前臂內(nèi)側(cè)；取樣液3mL于手心中；從手腕至臂肘上下涂擦60s；用流動(dòng)的清水沖洗前臂15s,不要搓擦；用紙巾沾干前臂，不要搓擦；用不含抑菌成分的對(duì)照樣品重復(fù)以上步驟清洗右臂；按上面所描述的試驗(yàn)步驟每日清洗前臂3次，每次間隔至少1h，在最后一次清洗之后，需記錄好時(shí)間，在12h之后,進(jìn)行滯留效果檢測(cè)。在第9次清洗前臂以后，受試者不能洗澡、淋浴或洗凈前臂，直到試驗(yàn)結(jié)束。
5.1.6.3.3試驗(yàn)階段
最后一次清洗后的12h或24h，將在受試者每只前臂上劃出一個(gè)試驗(yàn)區(qū)，對(duì)試驗(yàn)區(qū)進(jìn)行接種、封包和回收存活細(xì)菌,具體步驟如下:
將金黃色葡萄球菌（ATCC27217）連續(xù)轉(zhuǎn)種3代，取第3代培養(yǎng)物接種于胰蛋白大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB）中，在36℃±1℃的條件下培養(yǎng)20h±2h。然后用TSB適當(dāng)稀釋菌懸液，使菌懸液濃度約為108CFU/mL～109CFU/mL。
接種:在受試者的每只前臂中間部位（不要在手腕和肘皺褶處），用帶有印墨直徑為3.00cm的玻璃量筒扣在皮膚上，劃分出一個(gè)試驗(yàn)區(qū)。使用加樣器取10μL上述菌懸液，接種于前臂試驗(yàn)區(qū)（菌落數(shù)為106CFU/試驗(yàn)區(qū)～107CFU/試驗(yàn)區(qū)），用一次性接種環(huán)，把接種物涂成一圓形，使其與試驗(yàn)區(qū)邊緣應(yīng)有4mm～5mm的距離。
封包:細(xì)菌接種后立即用小塑料碗扣于染菌區(qū)上面，再用膠帶將小塑料碗固定在皮膚上，記錄封包的時(shí)間。
回收存活細(xì)菌:接種后2h±5min對(duì)前臂上接種的區(qū)域進(jìn)行取樣。將金屬筒放置于試驗(yàn)區(qū)中間部位，不要接觸到蓋有印墨的邊緣。將1mL含0.1%Triton-X100的0.075mol/L磷酸鹽緩沖液吸移至金屬筒內(nèi)，用尼龍刮菌棒刮洗金屬筒罩住區(qū)域內(nèi)的皮膚60s,將筒內(nèi)液體吸移至試管內(nèi)，再加1mL含0.1%TritonX-100的0.075mol/L磷酸鹽緩沖液，對(duì)該區(qū)域內(nèi)的皮膚進(jìn)行第二次刮洗30s，將第二次擦洗的液體，注入含第一次刮洗液體的試管中。
實(shí)驗(yàn)區(qū)試驗(yàn)后的消毒處理:對(duì)抑菌樣品組清洗后的實(shí)驗(yàn)區(qū)采樣之后，需用70%的酒精對(duì)實(shí)驗(yàn)區(qū)進(jìn)行消毒。然后對(duì)無(wú)抑菌成分的對(duì)照組清洗后的實(shí)驗(yàn)區(qū)以同樣方法進(jìn)行采樣、消毒。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用皮膚消毒劑對(duì)兩只前臂進(jìn)行消毒處理，處理后清水沖洗，擦干，再涂少量的抗生素軟膏。
接種與培養(yǎng):對(duì)每一個(gè)取樣進(jìn)行接種，以0.0375mol/L磷酸鹽緩沖液對(duì)樣品進(jìn)行10倍系列稀釋?zhuān)x適當(dāng)稀釋度取0.1mL接種于2個(gè)含5%羊血的TSA平板表面，用玻璃彎棒涂勻，在36℃±1℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h±4h,計(jì)數(shù)菌落數(shù)。
以試驗(yàn)同批次的稀釋液、培養(yǎng)基等分別設(shè)陰性對(duì)照。
5.1.6.4判定標(biāo)準(zhǔn)
各次試驗(yàn)陰性對(duì)照菌無(wú)菌生長(zhǎng)。實(shí)驗(yàn)不得少于16人次，抑菌率均≥50%，可判定該產(chǎn)品在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)有滯留抑菌作用。
5、評(píng)價(jià)方法
4、評(píng)價(jià)方法的選擇原則
4.1抗菌試驗(yàn)與抑菌試驗(yàn)區(qū)別
抗菌試驗(yàn)：測(cè)定抗菌產(chǎn)品對(duì)細(xì)菌和真菌的抗菌作用，試驗(yàn)過(guò)程中需要用中和劑終止殺菌作用。
抑菌試驗(yàn)：測(cè)定抑菌產(chǎn)品對(duì)細(xì)菌和真菌的抑菌作用，試驗(yàn)過(guò)程中不需要使用中和劑終止抑菌作用。
4.2根據(jù)產(chǎn)品性能選擇合適的評(píng)價(jià)方法
4.2.1抑菌效果評(píng)價(jià)方法的選擇原則
抑菌類(lèi)產(chǎn)品選擇抑菌效果評(píng)價(jià)方法。液體抑菌產(chǎn)品選擇懸液定量抑菌試驗(yàn)，膏體或半固體凝膠類(lèi)、黏稠狀抑菌產(chǎn)品選擇載體浸泡定量抑菌試驗(yàn)，濕巾類(lèi)或其他自身含有抑菌成分的產(chǎn)品選擇載體抑菌試驗(yàn)，肥皂類(lèi)固體抑菌產(chǎn)品選擇抑菌環(huán)試驗(yàn)，含有可溶性抑菌成分的紡織品選擇浸漬抑菌試驗(yàn)，含有持續(xù)抑菌作用的抑菌洗液選擇滯留抑菌試驗(yàn)。
4.2.2抗菌效果評(píng)價(jià)方法的選擇原則
抗菌類(lèi)產(chǎn)品選擇抗菌效果評(píng)價(jià)方法。液體抗菌產(chǎn)品選擇懸液定量殺菌試驗(yàn)，凝膠狀或膏狀抗菌產(chǎn)品選擇載體浸泡定量殺菌試驗(yàn)，濕巾類(lèi)或其他自身含有抗菌成分的產(chǎn)品選擇載體殺菌試驗(yàn)，含有可溶性抗菌成分的紡織品選擇浸漬抗菌試驗(yàn)。
含有不可溶抗菌成分的紡織品、無(wú)紡布、纖維等，經(jīng)鑒別不含可溶性抗抑菌成分后，采用燒瓶振蕩試驗(yàn)。
含有不可溶抗菌成分的瓷磚、塑料、金屬、涂料等，采用貼膜試驗(yàn)；對(duì)于涂于表面，干燥后具有持續(xù)抗菌作用的產(chǎn)品，進(jìn)行持續(xù)抗菌試驗(yàn)。
3、術(shù)語(yǔ)和定義
下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。
3.1抗菌
采用化學(xué)或物理方法殺滅或妨礙細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖，可減少其數(shù)量以及活性的過(guò)程。
3.2抑菌
采用化學(xué)或物理方法抑制或妨礙細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖及其活性的過(guò)程。
3.3持續(xù)抗菌作用
具有抗菌作用的消毒產(chǎn)品涂于物體表面，持續(xù)7d以上仍具有殺滅或妨礙細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖作用。
3.4中和劑
在殺滅微生物試驗(yàn)中，用以消除試驗(yàn)微生物與消毒劑的混懸液中，以及微生物表面上殘留的消毒劑，使其失去對(duì)微生物抑制和殺滅作用的試劑。
2、規(guī)范性引用文件
下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。
GB15979一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
FZ/T73023抗菌針織品
消毒技術(shù)規(guī)范（2002版）衛(wèi)生部（衛(wèi)法監(jiān)發(fā)〔2002〕282號(hào)）
1、范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了抗菌和抑菌評(píng)價(jià)方法的選擇原則和使用。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于具有抗菌和(或)抑菌功能產(chǎn)品的抗菌、抑菌效果的鑒定。
抗抑菌產(chǎn)品檢測(cè)新標(biāo)準(zhǔn)WST650-2019抗菌和抑菌效果評(píng)價(jià)方法于2019年7月1日起實(shí)施，健明迪檢測(cè)，準(zhǔn)確把握消毒政策要求變化，提供抗抑菌劑等消毒產(chǎn)品產(chǎn)品檢測(cè)備案，具備CNAS與CMA雙資質(zhì)認(rèn)可，專(zhuān)業(yè)權(quán)威第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)。下面為抗抑菌劑檢測(cè)備案新政策WST 650-2019簡(jiǎn)要內(nèi)容。
